ACTIVIDAD ANTITUMORAL IN VIVO Y COMPOSICIÓN DE UN EXTRACTO DE ACEITE DE PROPÓLEO

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Adriana Andrade Carvalho a, Daiane Finger b, Christiane Schinieder Machado b, Eduardo Morgado Schmidt b, Patrícia Marçal da Costa a, Ana Paula Negreiros Nunes Alves c, Thamires Maria Fontenele Morais d, Maria Goretti Rodrigues de Queiroz d, Sueli Pércio Quináia b, Marcos Roberto da Rosa b,Julio Murilo Trevas dos Santos b, Cláudia Pessoa a, Manoel Odorico de Moraes a, Letícia Veras Costa-Lotufo a,Alexandra Christine Helena Frankland Sawaya e, Marcos Nogueira Eberlin f, Yohandra Reyes Torres b,

  • a Departamento de Fisiologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, CE, Brazil
  • b Departamento de Química, Universidade Estadual do Centro-Oeste, Guarapuava, PR, Brazil
  • c Departamento de Clínica Odontológica, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, CE, Brazil
  • d Faculdade de Farmácia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, CE, Brazil
  • e Departamento de Fisiologia Vegetal, Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas, Campinas, SP, Brazil
  • f Laboratório ThoMSon de Espectrometria de Massas, Instituto de Química, Universidade Estadual de Campinas, Campinas, SP, Brazil

RESUMEN

El presente estudio tuvo como objetivo evaluar in vivo e in vitro la actividad antitumoral de un extracto de propóleos obtenido con aceite vegetal comestible y sus fracciones y también para investigar su composición química por LC – MS y LC – MS / MS. Para evaluar los aspectos toxicológicos relacionados con el tratamiento con extracto de propóleos, Se realizaron análisis hematológicos, bioquímicos, histopatológicos y morfológicos de los animales tratados. Todos los extractos de propóleos mostraron una actividad antitumoral in vivo en el modelo experimental con un efecto de toxicidad moderada a niveles de exposición experimental. El extracto de aceite fue tan efectivo como el etanólico. extracto al inhibir el crecimiento tumoral. Los ensayos in vitro mostraron que todo el extracto de aceite produjo mejor inhibición de las células tumorales que sus fracciones. LC – MS y LC – MS / MS identificaron cuatro ácidos fenólicos y tres flavonoides El potencial anticancerígeno del extracto de aceite de propóleos ha sido demostrado y el aceite vegetal comestible se mostró como un disolvente alternativo atractivo para extraer el propóleo natural bioactivo componentes.

© 2010 Elsevier Ltd. Open access under the Elsevier OA license

1. Introducción

El uso del propóleo es antiguo en la medicina tradicional. al menos 300 aC (Ghisalberti, 1979). Hoy, esta resinosa El producto de la abeja continúa utilizándose en todo el mundo, y un amplio espectro

de las actividades biológicas para el propóleos ha sido reportado, incluyendo anticancerígeno, antioxidante, antiinflamatorio, antibiótico y antifúngico actividades (Burdok, 1998; Marcucci, 1995). El efecto biológico del propóleos se atribuye a sus productos químicos bioactivos naturales, como los polifenoles, agliconas flavonoides, ácido fenólico y sus ésteres, ácido cafeico y sus ésteres y aldehídos fenólicos y cetonas (Ors olic & Bas ic, 2003).

Recientemente, la atención se centra en la actividad anticancerígena de propóleos. Los estudios, sin embargo, se han realizado utilizando etanólico. o extractos hidroalcohólicos (Ors olic & Bas ic, 2003). Etanólico Las formulaciones de propóleos impiden su consumo por personas que No puede consumir alcohol por razones médicas, como pacientes de la diabetes. Por lo tanto, varias patentes se han ocupado de nuevos métodos o solventes además de etanol para extraer propóleos (Kasuma y Kenichi, 2001a, 2001b; Namiki et al., 2005). Estas patentes han reportado El uso de aceites vegetales comestibles, triglicéridos y ácidos grasos como disolventes de extracción para propóleos. Datos sobre la actividad biológica. y la composición química de los extractos de aceite de propóleos son, sin embargo, escaso. Tosi, Donini, Romagnoli y Bruni (1996) evaluaron la actividad antimicrobiana de extractos comerciales de propóleos preparados con diferentes solventes incluyendo aceites. Informaron una amplia gama de actividad antimicrobiana para el extracto de aceite y concluyó que el el solvente empleado para la extracción de propóleos influye en la potencia de su actividad antimicrobiana. Hemos comparado antiproliferativo actividad contra las líneas celulares HL-60, MDAMB-435 y SF-295 de extractos de aceite y propóleos etanólicos (Buriol et al., 2009) y encontrado que los extractos de aceite fueron activos contra la línea celular tumoral probada mostrando un mayor potencial anticancerígeno contra la línea celular SF-295.

El objetivo de este estudio fue investigar los efectos del petróleo y extractos etanólicos de propóleos en modelos experimentales. Hematológico, análisis bioquímicos, histopatológicos y morfológicos del tumor y los órganos, incluidos el hígado, el bazo y el riñón, se realizaron para evaluar los aspectos toxicológicos del tratamiento. Los resultados de este estudio, por lo tanto, deberían avanzar conocimiento de los beneficios antitumorales de los extractos de aceite comestible de propóleos y proporcionar una mejor comprensión de su aplicación en el prevención / tratamiento de tumores malignos. Además biológico ensayos, el extracto de aceite de propóleos también se fraccionó por cromatografía y sus fracciones analizadas usando espectrometría de masas para evaluar su composición química.

2. Materiales y métodos

2.1. Propóleos y extractos

2.1.1. Muestras

Las muestras de propóleos fueron recolectadas en 2006 y suministradas por Campolin y Schmidt Company de la ciudad de Prudentópolis (Estado de Paraná, Brasil). El propóleos se almacenó a 18 ° C hasta la extracción.

2.1.2. Extractos

Se extrajeron cincuenta gramos de propóleos en un agitador con 500 ml. de aceite de canola o etanol al 70%, durante 24 h, a temperatura ambiente. Después de ese período, las soluciones extractivas se filtraron. El solvente se eliminó de la solución hidroalcohólica produciendo EEP70. El extracto oleoso de propóleos se repartió en metanol / 80% v / v. el agua y la fase metanólica acuosa se secaron en un rotacional evaporador produciendo ODEP.

2.2. Fraccionamiento de cromatografía.

Se aplicaron ciento ochenta miligramos de ODEP en metanol en una columna de vidrio (3 80 cm) que contiene Sephadex LH-20.

La elución se realizó con metanol. Un total de 80 fracciones de 8 ml cada uno se obtuvieron. Estas fracciones se unieron en seis nuevas fracciones, etiquetadas como OLSx 1–6, mediante cromatografía en capa fina análisis en gel de sílice (cloroformo en fase móvil / acetona / acético ácido 18: 4: 1 v / v / v y visualización de manchas a UV de 254 nm con el uso de FeCl3 como reactivo de color).

2.3. Análisis de espectrometría de masas.

2.3.1. ESI () –MS datos

Se analizaron muestras de OLSx 1–6 utilizando un espectrómetro de masas Q-Trap

(Applied Biosystems) con la infusión directa de la muestra soluciones en la fuente de ionización por electropulverización que opera en el modo de iones negativos. Los voltajes capilares y de cono se establecieron en 4500 V y 50 V, respectivamente, con una temperatura de desolvatación de 100 C.

2.3.2. Análisis de espectrometría de masas por cromatografía líquida (LC – MS)

OLSx 3–6 se introdujeron en una HPLC (Agillent) con un Columna analítica lBondapak C18 (Aguas, 3,9 300 mm, 10 lm) y detectado en un analizador de masas Q-Trap. ESI () –MS fue llevado a cabo con voltajes capilares y de cono establecidos en 4500 y 50 V, respectivamente, y una temperatura de desolvatación de 300 C. UNA Se empleó la fase móvil binaria de acetonitrilo y 1% de ácido fórmico. Se realizó un gradiente lineal a partir del 30% de acetonitrilo. a 100% de acetonitrilo, en 30 minutos, y un caudal de elución de 1 ml / min.

2.3.3. ESI () –MS / MS

Los espectros de masa en tándem se adquirieron usando un híbrido de alta resolución y espectrómetro de masas Micromass Q-TOF de alta precisión (5 ppm) (Aguas) y por disociación inducida por colisión a ca.

15 V. Los voltajes capilar y de cono se ajustaron a ± 3000 y ± 40 V, respectivamente, para el modo negativo o positivo de ionización la temperatura de desolvatación fue de 100 ° C; nitrógeno y argón eran utilizado como desolvatación o gas de colisión, respectivamente.

2.4. Ensayos biológicos

2.4.1 Ensayos de citotoxicidad

La citotoxicidad de los extractos y fracciones de propóleo de ODEP se evaluó contra cuatro líneas celulares tumorales humanas: HL-60 (leucemia), HCT-8 (colon), MDA / MB-435 (mama) y SF-295 (cerebro) obtenido del Instituto Nacional del Cáncer (Bethesda, MD, EE. UU.). La viabilidad general de las células cultivadas fue determinada por la reducción del colorante amarillo 3- (4,5-dimetil-2-tiazolil) -2,5-difenil-Bromuro de 2H-tetrazolio (MTT) a un producto de formazán azul, según lo descrito previamente por Mosmann (1983). Las células tumorales se mantuvieron en medio RPMI 1640, suplementado con 10% de suero fetal bovino, 1% de penicilina y estreptomicina a 37 C con 5% de CO2. Para todos los experimentos se sembraron células a 0.3 106 células / ml (HL-60, MDA / MB-435 e SF-295) y 0.7 105 células / ml (HCT-8), y se incubaron durante 72 h con extractos de propóleos (0.001–50 lg / ml ODEP y EEP70) y fracciones (0,001–25 lg / ml), en las condiciones descritas anteriormente. Después de la centrifugación y la eliminación de la solución, se agregó la solución MTT y Las placas se incubaron, se centrifugaron y los sólidos se disolvieron. en DMSO puro y estéril. La absorbancia se midió en una placa espectrofotómetro DTX-800 (Beckman Coulter) a 595 nm. Doxorrubicina (Sigma) se utilizó como control positivo.

2.4.2 Ensayos antitumorales in vivo

2.4.2.1. Animales

Se obtuvieron un total de 80 ratones suizos (machos, 25-30 g) de la casa central de animales de la Universidad Federal de Ceará, Brasil, fueron usados. Los animales fueron alojados en jaulas con libre acceso a comida y agua (conforme a una dieta de roedores bien definida). Todos los animales se mantuvieron bajo un ciclo de luz y oscuridad de 12:12 h (luces encendidas a 6:00 am.). Los animales fueron tratados de acuerdo con los principios éticos de experimentación animal de COBEA (Colégio Brasileiro de Experimentación Animal), Brasil. El comité de estudios animales de la Universidad Federal de Ceará aprobó el experimental protocolo.

Sarcoma 180 células tumorales se mantuvieron en las cavidades peritoneales de los ratones suizos obtenidos de la casa de animales central de la Universidad Federal de Ceará.

2.4.2.2. Determinación del efecto del extracto de propóleos sobre el tumo crecimiento in vivo.

Sarcoma de diez días 180 células tumorales de ascitis (2 ± 106 células / 500 ll) se implantaron por vía subcutánea en la izquierda ingle posterior de los ratones experimentales. Un día después de la inoculación, los extractos de propóleos (50 y 80 mg / kg a ODEP y EEP70) o se disolvieron 5-FU (25 mg / kg) en DMSO al 4% y se administraron intraperitonealmente durante 7 días. El control negativo fue inyectado con 4% DMSO. El día 8, los ratones fueron asesinados y los tumores fueron extirpados, pesado y fijado en formaldehído al 10%. La relación de inhibición (%) se calculó mediante la siguiente fórmula: relación de inhibición (%) = [(A B) / A] 100, donde A es el peso tumoral promedio del control negativo, y B es el peso tumoral del tratado grupo.

2.4.3 Análisis toxicológico

2.4.3.1. Efectos de los extractos de propóleos sobre los órganos y el peso corporal.

Determinación del efecto de los extractos de propóleos en el cuerpo del órgano los pesos se midieron al principio y al final del tratamiento y los animales fueron observados por signos de anormalidades a lo largo del estudio. Las posiciones, formas, tamaños y color de órganos internos, a saber, riñones, hígado y bazo se observaron para cualquier signo de lesiones graves. Estos órganos fueron recolectados, pesados y fijado en 10% de formaldehído.

2.4.3.2. Determinación del efecto del extracto de propóleos en parámetros bioquímicos

Después de ayunar durante 6-8 h, los animales fueron sometidos a Recolección de sangre del plexo orbitario para análisis bioquímicos (urea y creatinina para investigar cualquier alteración de la función renal; AST y ALT como parámetro hepático). El análisis se realizó en un equipo semiautomático (LabQuest), que utiliza colorimétrico enzimático kits, mientras que las células hematológicas se cuantificaron en un Sysmex KX-21 N. La metodología de LabQuest y Sysmex los equipos se basan, respectivamente, en el principio de absorción e impedancia

2.4.3.3. Determinación del efecto de los extractos de propóleos en parámetros hematológicos.

Después de ayunar durante 6-8 h, los animales fueron enviados a la extracción de sangre del plexo orbitario para análisis hematológicos. Los análisis hematológicos fueron realizados por un óptico microscopio Olympus BX 41. Parámetros hematológicos, incluidos el contenido de hemoglobina, el recuento de plaquetas, el recuento total de leucocitos como así como un recuento diferencial de leucocitos, como eosinófilos (%),Se midieron linfocitos (%), neutrófilos (%) y monocitos (%).

2.4.3.4. Histopatología y observaciones morfológicas.

Después de serfijado con formaldehído, tumores, hígados, bazos y riñones fueron examinados groseramente por cambios de tamaño o color y hemorragia. Posteriormente, porciones del tumor, hígado, bazo y riñón.se cortaron en trozos pequeños, seguidos de tinción con hematoxilina y eosina de las secciones histológicas. Los análisis histológicos fueron realizados por microscopía de luz. La ocurrencia y el alcance de se registraron lesiones hepáticas o renales atribuidas a fármacos.

3. Resultados

3.1. Análisis de la composición química de ODEP por ESI () –MS, LC – MS y LC – MS / MS

El fraccionamiento ODEP dio fracciones OLSx 1–6, que fueron primero analizado por infusión directa ESI () –MS. Desde propóleos es un rico natural producto de abeja que contiene principalmente compuestos fenólicos, como derivados del ácido cinámico y flavonoides, los iones se produjeron principalmente por ionización por electro pulverización en el modo de iones negativos. ESI ()es una técnica de ionización suave y los espectros de masas se detectan principalmente componentes como sus moléculas desprotonadas intactas. ESI () –MS proporciona por lo tanto caracterización de huellas dactilares de extractos de propóleos a través de perfiles característicos de su composición química en términos de los componentes más polares y ácidos o básicos (Sawayaet al., 2004a, 2007).

La figura 1 muestra las huellas digitales ESI () –MS de fracciones ODEP e indica grandes diferencias en la composición química entre las fracciones. OLSx1 y OLSx2 eran fracciones complejas con varios iones abundantes de alto a medio, como m/z 387, 311, 341 y 275 (OLSx1). Para OLSx2, los iones más abundantes fueron aquellos de m/z 315, 339, con iones medios abundantes de m/z 265, 325, 293 y 377. Las fracciones OLSx 3–6 fueron más simples y mostraron principalmente un solo ion principal. OLSx3 mostró principalmente los iones de m/z 247, 231,301 y 393 mientras que OLSx4 mostró los de m/z 301, 245, 393 y 287 como el más abundante. Las fracciones OLSx5 y OLSx6 mostraron unión común principal de m/z 299 y otros iones menos abundantes de m/z 329 y 387 (OLSx5) y m/z 249, 285, 311 y 387 (OLSx6).

Para caracterizar los componentes de las fracciones, LC–MS y LC–MS / MS se realizaron. A través de comparaciones con el patrón de fragmentación de compuestos previamente identificados (Marcucci, Sawaya, Custodio, Paulino y Eberlin, 2008), varios componentes han sido identificado: ácido 3,4-dihidroxi-5-prenil-cinámico (m/z 247, OLSx3); dihidrokaempferida (m / z 301, OLSx3 y OLSx4); 3-prenil-4- ácido hidroxicinámico (m/z 231, OLSx3); (E) -3 – {- 4-hidroxi-3 – [(E) -4- (2,3-dihidrocinamoil oxi) -3-metil-2-butenil] -5-prenilfenilo} – Ácido 2-propenoico (m / z 447, OLSx2). Isosakuranetin (m / z 285, OLSx4 y OLSx6) se identificaron mediante la comparación de su fragmentación MS / MS con un estándar amablemente proporcionado por Vassya S. Bankova, (Academia de Ciencias de Bulgaria). Hemos identificado algunos de esos compuestos previamente en los extractos de aceite de propóleos (Buriol et al., 2009).

Además, LC – MS identificó dos compuestos con el mismo m/z299 pero diferente tiempo de retención. Compuesto en OLSx2 con [M–H]de m/z 299 y tR 24 min mostraron en su ESI () –MS/MS una fragmentación al ion de m/z 255 a través de la pérdida inicial de 45 Da y de m/z 244, 200 y 145. Se identificó como ácido 3,5-diprenil-4-hidroxicinámico también conocido por artepellin C. ESI () –MS / MS del otro compuesto con

[M–H] de m/z 299 pero se sometió a tR 14 min en OLSx5 y OLSx6 fragmentación al ion de m/z 284 a través de la pérdida inicial de un metiloradical y fue identificado como kaempferide. Otros iones fragmentarios de m/z 164, 151 y 107 son típicos de la escisión de los flavonoides centrales Anillo en C (Cuyckens & Claeys, 2004) (Tabla 1).

3.2. Ensayos de citotoxicidad in vitro

La Tabla 2 muestra los resultados de los ensayos citotóxicos in vitro para los extractos de propóleos y las fracciones obtenidas por cromatografía separación de ODEP en Sephadex LH-20. El extracto de propóleos obtenidos con aceite de canola y secos (ODEP) se muestran moderados citotoxicidad contra leucemia (HL-60), melanoma (MDA-MB-435) y las células cancerosas del glioblastoma (SF-295), un mejor resultado que el extracto etanólico (EEP70). Al analizar la citotoxicidad deFracciones ODEP, era evidente que las fracciones eran menos activas que el extracto de propóleos (ODEP) en las líneas celulares evaluadas, mientras que OLSx4 y OLSx5 mostraron citotoxicidad moderada contra leucemia (HL-60) y colon (HCT-8).

3.3. Efecto de los extractos de propóleos sobre el crecimiento tumoral in vivo y sobre los órganos y peso corporal

Para verificar si los efectos citotóxicos observados in vitro también ocurrieron in vivo, utilizamos el modelo Sarcoma 180 (S-180) que es un tumor originado en ratones frecuentemente utilizado en antitumorales in vivo investigación (Gonzaga et al., 2009). La figura 2 muestra los efectos de la Extractos de propóleos en ratones trasplantados con tumor S-180. Ahí hubo una reducción significativa del peso del tumor en todos los extractos probado Se compararon las diferencias entre los grupos experimentales por ANOVA seguido por el estudiante Newman Keuls o Bonferroni pruebas (p <0.05). En el octavo día, el peso tumoral promedio de la el control de ratones inoculados con sarcoma 180 fue de 2.05 ± 0.22 g. En la presencia de EEP70, el peso del sarcoma 180 se redujo a 0.94 ± 0.35 y 0.90 ± 0.22 g en dosis de 50 y 80 mg / kg, respectivamente. Estas reducciones son equivalentes a las relaciones de inhibición de 53,94% y 56,29%. En presencia de ODEP, el sarcoma 180 el peso se redujo a 0,92 ± 0,14 y 0,96 ± 0,24 g a dosis de 50 y 80 mg / kg, respectivamente. Estas reducciones son equivalentes a relaciones de inhibición del 54,94% y 53,35%. A 25 mg / kg, 5-FU reducido peso tumoral en 51.56% dentro del mismo período. Estos resultados mostraron que la relación de inhibición del extracto etanólico era laxigual que el extracto de aceite y no se observaron diferencias cuandoxLos extractos se ensayaron a dosis de 50 y 80 mg / kg. Fue demostradox que ambos extractos de propóleos inhibieron el sarcoma 180xcrecimiento tumoral en ratones.

Después de matar a los animales, se pesaron los órganos. No significativo se observaron cambios en los pesos de los órganos en cualquiera de los extractos.animales tratados (Fig. 2). Después del tratamiento con 5-FU,sin embargo, los pesos del bazo se redujeron significativamente cuando en comparación con el grupo control (p <0,05). Sin ganancia significativa en peso corporal se observó entre los grupos (p> 0.05) (datos no mostrados).

Fig. 1. Huellas digitales ESI () –MS de fracciones ODEP.

3.4. Efecto de los extractos de propóleos sobre los parámetros bioquímicos.

No hay cambios significativos en los niveles renales (niveles de urea y creatinina) o hígado [actividad enzimática de las transaminasas aspartato aminotransferasa(AST) y alanina aminotransferasa (ALT)] se observaron parámetros en los animales tratados con extractos de propóleos (datos comparados por ANOVA seguidos por StudentNewmanKeuls o pruebas de Bonferroni p <0.05)en ratones trasplantados con tumor de Sarcoma 180 (Fig. 3). Los animales tratados con 5-FU tienen alteración en los parámetros renales y hepáticos.

3.5. Histopatología, cambios morfológicos y morfométricos.

Análisis histopatológicos de los tumores extirpados dellos ratones de control mostraron una neoplasia maligna compuesta de pleomórficos células poligonales con poco citoplasma, algunas con núcleos vesiculares, y macronucleoli acidófilo. Invasión muscular, áreas de necrosis de coagulación y figuras mitóticas típicas y atípicas fueron también observado. En los tumores extirpados de animales tratados, se observaron áreas extensas de necrosis coagulativa.

Los análisis histopatológicos de hígados, eliminados de todos los grupos, mostraron focos de esteatosis microvesicular. Hinchazón leve dese observaron hepatocitos y esteatosis microvesicular focal en el grupo de control negativo. En animales tratados con 5-FU célula intensa hinchazón de hepatocitos, esteatosis microvesicular, hiperplasia de se observaron células de Kupffer y hemosiderina. En animales tratados con ODEP, inflamación moderada de hepatocitos de células, esteatosis microvesicular,hiperplasia de células de Kupffer, focos inflamatorios y bilirrubina fueron observado. En animales tratados con EEP70 encontramos hinchazón intensa de hepatocitos y grandes áreas de esteatosis microvesicular.

Los análisis de los riñones mostraron cilindrohialina, lo que indica una dificultad del sistema de filtración renal de las proteínas. Hinchazón severa del epitelio tubular también se encontró en todos los grupos, incluidos el 5-FU. Todos los grupos mostraron folículos linfoides en el bazo,a veces con bordes grandes, irregulares, mal definidos, probablemente relacionados al tumor real (sarcoma 180) que conduce a este hallazgo histológico . Todos los grupos mostraron áreas de hemorragia.

3.6. Efecto de los extractos de propóleos sobre los parámetros hematológicos.

Los animales trasplantados con Sarcoma 180 tumores tratados con 5-FU mostró una fuerte reducción en el total de leucocitos(p <0,05). El tratamiento con extractos de propóleo no demostró alteración (Tabla 3).

Fig. 2. Relación de inhibición en tumor sólido y efecto de extractos de propóleos en pesos de órganos.

A.A. Carvalho y col. / Química alimentaria 126 (2011) 1239–1245

Fig. 3. Efecto de los extractos de propóleos sobre los parámetros bioquímicos en sangre periférica de ratones trasplantados con tumor de sarcoma 180.

4 Discusiones

ESI () –MS, LC – MS y LC – MS / MS identificaron varios preniladosácidos fenólicos y flavonoides en ODEP, lo que demuestra que el aceite vegetal fue capaz de extraer importantes compuestos fenólicos naturales bioactivos compuesto de propóleos crudos. Compuestos identificados en el presente se han encontrado trabajos en extractos alcohólicos e hidroalcohólicos de propóleos de Brasil y otros países y están relacionados con muchos actividades biológicas (Banskota, Tezuka y Kadota, 2001; Banskotaet al., 1998; Lustosa, Galindo, Nunes, Randau y Neto, 2008; SawayaSouza, Marcucci, Cunha y Shimizu, 2004; Sawaya y col.2002b). Esto es así para la artepilina C, por ejemplo, un compuesto principal en el propóleo verde brasileño, para el cual las actividades biológicas, como antimicrobiano, antioxidante y antitumoral, así como aumenta en la respuesta inmune contra la leucemia se han reportado (Shimizu,Ashida, Matsuura y Kanazawa, 2004). Debido a estas propiedades biológicas, se considera propóleos, que contiene artepilina C como propóleos de alta calidad y el contenido de artepilina C ya es utilizado en el control de calidad por algunas empresas (Funari & Ferro,2006). Mediante inspecciones visuales de los cromatogramas (datos nose muestra), tanto de LC – MS como de LC – UV (PDA), era evidente que La artepilina C está comúnmente presente en el propóleos de Prudentópolis, y que los extractos de aceite de propóleos contienen niveles significativos de ácidos fenólicos prenilados, incluida la artepilina C. Varios otros los iones en el extracto oleoso de propóleos permanecieron desconocidos, lo que indica la necesidad de continuar con los estudios de la composición química de este prometedor extracto ODEP.

Todos los regímenes de tratamiento para la mayoría de los cánceres producen efectos secundarios efectos, lo que hace que este tratamiento sea extremadamente desagradable para pacientes Los científicos han dedicado esfuerzos para desarrollar nuevos terapias para el tratamiento del cáncer. El propóleos ha sido un tema de intensa investigación, especialmente en las áreas de investigación contra el cáncer (Banskota et al., 2000; El-khawaga Om-Ali, Tarek y Mohammed, 2003; Padmavathi, Senthilnathan, Chodon y Sakthisekaran, 2006). La mayoría de esos estudios evaluaron el etanol acuoso.

o extractos de metanol de propóleos, por lo tanto, en este trabajo evaluamos el efecto antitumoral de un extracto de aceite de propóleos. Nosotros han informado previamente datos que comparan la actividad antiproliferativa contra líneas celulares de aceite y etanólicos contra células HL-60, MDAMB-435 y SF-295 extractos de propóleos (Buriol et al., 2009). Porque un diferente muestra de propóleos (pero de la misma región) y se utilizaron extracciones de diferentes condiciones, no podemos comparar directamente el IC50 valor informado anteriormente con los valores actuales, pero en ambas investigaciones los extractos de aceite de propóleos fueron activos contra los probados líneas celulares tumorales que indican más potencial anticancerígeno contra el Línea celular SF-295 que los extractos etanólicos. Los resultados actuales muestran que el extracto de aceite de propóleos tiene sustancias citotóxicas con efectos similares a los extractos etanólicos más comunes, lo que hace que el extracto atractivo para aplicaciones donde se debe evitar el etanol. El extracto de aceite de propóleo también produjo una mejor inhibición de células tumorales que sus fracciones, lo que indica que el propóleos es citotóxico la actividad es probablemente un efecto sinérgico de “escopeta” de sus muchos componentes bioactivos. Por lo tanto, la actividad biológica del propóleos debería ser sin embrago ser altamente dependiente mucho del proceso de extracción.

En el ensayo modelo Sarcoma 180 se demostró que todos los extractos de propóleos inhibieron el crecimiento tumoral en ratones con la misma relación de inhibición como el control positivo 5-FU pero con menos efectos secundarios.

Los análisis histopatológicos de los órganos extraídos de los tratados los animales mostraron que el tratamiento con 5-FU, ODEP y EEP70 llevó a la hiperplasia y necrosis de células de Kupffer, que señala la presencia de un agente tóxico. Sin embargo, estas alteraciones podrían considerarse reversible (Kummar, Abbas y Fausto, 2004; Scheuer y Lefkowitch,2000).

Los parámetros renales también fueron evaluados. El análisis histopatológicos de los riñones mostraron áreas focales de necrosis en el epitelio tubular en todos los grupos de tratamiento, lo que sugiere que el tratamiento con 5-FU, ODEP y EEP70 causaron daño renal. Necrosis del epitelio del túbulo renal puede ocurrir a gran escala como consecuencia de la administración de diferentes clases químicas (OlsenY Solez, 1994). Aunque las modificaciones de los tejidos renales fueron observado, el análisis de los parámetros bioquímicos no mostró cambios en los niveles de urea y creatinina. Sin embargo, la urea en sangre aumentó solo mucho tiempo después de la alteración renal, que puede explicar por qué el tratamiento en este estudio no logró inducir ninguna alteración en los niveles de urea en sangre.

Por separado de los efectos hepatotóxicos y nefrotóxicos, anticancerígeno las drogas también producen depresión hematopoyética tardía, como se observó en tratamiento con metotrexato y 5-FU (Bezerra et al., 2008;Katzung, 2003). De hecho, la mayoría de los medicamentos quimio terapéuticos, incluidos5-FU, son inmunosupresores porque matan muchas células sanas así como las células tumorales (Bezerra et al., 2008; Takiguchi et al., 2001) y tienen efectos secundarios negativos. Uno de los riesgos de la radiación y la quimioterapia en el tratamiento de pacientes con cáncer es el desarrollo de leucopenia, que aumenta sustancialmente el riesgo de infecciones.Observamos aquí leucopenia en el tratamiento con 5-FU, pero no en el tratamiento EEP70 y ODEP.

El peso de los bazos en los animales tratados con 5-FU también fue significativamente menor que en el grupo control, que también indicóun efecto secundario inmunosupresor de 5-FU, pero el tratamiento con propóleos no causó alteración en el peso del bazo. Al comparar en los análisis histopatológicos, observamos que todos los grupos tratados con propóleos mostró congestión en la pulpa roja, lo que indica un posible efecto sobre el sistema inmodulador. Está bien informado que el mecanismo de los efectos antitumorales provocados por los extractos de propóleos ha sido atribuido a su efecto en el sistema inmodulador.

5. Conclusiones

Los resultados del presente estudio indican el potencial de los aceites del extracto de propóleos para el tratamiento del cáncer. El libre de etanol del extracto de aceite vegetal de propóleos se mostró importante in vitro y efectos antitumorales in vivo debido a un efecto sinérgico de sus muchos bioactivos constituyentes con signos moderados de toxicidad.

Agradecimientos

Queremos agradecer a Vassya S. Bankova, (Academia Búlgara de Ciencia) para el estándar de isosakuranetina. El apoyo financiero fue proporcionado por Finep y Fundación Araucária a través de 10908

  • PPP /2006 y 7102 / PPI fase I-2004 y fase II-2006. DF y EMS deseo agradecer por una beca de CAPES y CSM gracias por una beca de la Fundación Araucária. MNE y AFWS desean gracias a FAPESP y CNPq por el apoyo financiero. Los autores también dan las gracias a Silvana França dos Santos y Erivanda França por su asistencia técnica. ACHFS agradece a CAPES por una beca pos doctoral.

 

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